C18色譜柱使用過程中應該注意這些因素，才能有效增加使用壽命。

　　一、流動相因素

　　1、流動相pH

　　不同基質的填料具有不同的pH適用范圍。常溫下無定形硅膠在純水中的溶解度約為100 mg?L - 1 ,且在pH 1～9的范圍內溶解的硅膠量幾乎是常量,考慮到溶解速度的影響,對于硅膠基質的填料,其所能承受的流動相pH范圍約為1～8。鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對流動相的適應范圍大大增加,如現在廣泛使用的反相色譜填料C1 8 (十八烷基硅烷鍵合硅膠) ,其pH適用范圍可達2～10。當流動相pH值超出酸性范圍時,鍵合相易發生水解而流失;當流動相pH超出堿性范圍時,會加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子,這兩種反應均是不可逆反應,特別是在溫度較高( > 40℃)的環境下,會使柱效迅速降低而報廢。

　　2、流動相變質

　　當前使用為廣泛的是硅基鍵合相填料,當以水溶液作為流動相或流動相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時,水溶液中或緩沖鹽溶液中會滋生出一些細菌或霉菌,從而堵塞固定相顆粒間的空隙。特別是對于多元自動比例混合的液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨立存貯,因存放時間較長而容易發生此類問題。

　　3、流動相純度

　　目前廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10 nm,色譜柱在使用中會有大量的流動相通過,如流動相含有微量不溶性雜質顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成C18色譜柱機械性堵塞,引起柱壓升高而無法正常使用。

　　4、其它因素

　　如流動相的極性對柱子也有一定影響,甲醇、水、冰醋酸等極性較大的物質會破壞硅膠填料柱,正丁醇、二氯甲烷等極性小的物質會破壞化學鍵合硅膠柱,堿性溶液會破壞陽離子交換樹脂色譜柱,酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。

　　二、樣品因素

　　1、樣品的溶解性

　　樣品試樣在配制中,如有少量微粒未能*溶解,則會隨試樣一起進入色譜柱,同樣會沉積在柱頭處,造成色譜柱的堵塞。

　　2、樣品的純度

　　樣品中可能含有待分析組分以外的各種組分或雜質,這些組分或雜質可能會在柱內產生不可逆吸附,從而使固定相的活性點被覆蓋,保留特性發生變化。

　　3、樣品的化學性質

　　待測試樣中的各種組分與填料之間應具有化學穩定性,比較典型的是在使用氨基鍵合柱時,應避免使用含羰基的化合物和流動相,如丙酮、乙酸乙酯等,以免固定相中的NH2 和酐、酮發發希夫( Schiff)縮合而使固定相破壞。

　　三、影響色譜柱產品壽命的其它因素

　　影響C18色譜柱壽命的因素很多,除流動相和樣品因素外,還有其它一些外在因素,如柱壓的影響,溫度的影響,色譜柱的正確沖洗,色譜柱的正確安裝等。